Plasmide CRISPR/Cas9 KO FHL-1 (h): sc-403541

Présentation

FHL1 code la protéine « four-and-a-half LIM domains protein 1 » (FHL-1), une protéine adaptatrice composée uniquement de domaines LIM, enrichie dans le muscle strié, qui sert d’échafaudage à des complexes multiprotéiques au niveau du sarcomère et du costamère. FHL-1 coordonne l’organisation du cytosquelette, la mécanotransduction et les réponses transcriptionnelles en reliant des protéines structurales à des nœuds de signalisation impliqués dans la différenciation et le remodelage musculaires. Une altération de la fonction de FHL1 est associée à des myopathies et des cardiomyopathies héréditaires, où des interactions protéine–protéine perturbées peuvent compromettre l’intégrité sarcomérique et les voies de réponse au stress. Au-delà de la biologie musculaire, FHL-1 a également servi de modèle pour étudier l’assemblage de complexes de signalisation médié par les domaines LIM et la régulation contextuelle de l’expression génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FHL-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FHL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FHL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FHL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FHL-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FHL1 pour l'étude de la signalisation de FHL-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FHL1 essentiels à la fonction de FHL-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FHL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FHL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FHL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FHL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FHL-1 plasmide HDR (h) et le FHL-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FHL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FHL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.