Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGFR-3: sc-400184-ACT

FGFR3 code le récepteur 3 du facteur de croissance des fibroblastes (FGFR‑3), une tyrosine kinase transmembranaire qui se lie aux ligands FGF afin de réguler la prolifération et la différenciation cellulaires, ainsi que l’homéostasie tissulaire. Lors de son activation, FGFR‑3 transmet des signaux via des voies majeures, notamment RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT, PLCγ et STAT, afin de moduler les programmes transcriptionnels et les décisions de destin cellulaire. Une activité dérégulée de FGFR3 a été impliquée dans des anomalies du développement squelettique et divers processus oncogéniques, et une signalisation récepteur altérée peut remodeler les réseaux de rétrocontrôle et de dialogue croisé dépendants des facteurs de croissance. En tant que nœud de voie de signalisation, FGFR‑3 est largement utilisé pour étudier le trafic du récepteur, la spécificité des ligands, la dynamique de phosphorylation et les réponses transcriptionnelles en aval.

FGFR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGFR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGFR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGFR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGFR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGFR-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGFR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGFR-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGFR-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGFR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.