Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-BP: sc-404956-ACT

FGFBP1 code pour la protéine 1 de liaison aux facteurs de croissance des fibroblastes (FGF-BP), un transporteur sécrété qui mobilise les FGF liés à l’héparine depuis la matrice extracellulaire et augmente la biodisponibilité de la signalisation FGF. En potentialisant les interactions ligand–récepteur, FGF-BP peut influencer des processus associés aux voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, notamment la prolifération cellulaire, la migration et le remodelage angiogénique au sein des microenvironnements tissulaires. Une expression altérée de FGFBP1 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques et la protéine est fréquemment étudiée comme modulateur de phénotypes induits par les facteurs de croissance, de la dynamique de la matrice extracellulaire et de la communication stroma–épithélium. Ces propriétés font de FGFBP1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation de la voie FGF et de la contribution du protéome sécrété aux changements d’état cellulaire.

FGF-BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGFBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGFBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGFBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-BP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGFBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-BP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-BP dans les cellules tumorales présentant une expression de FGFBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.