Plásmido CRISPR de Activación (h) FGF-5: sc-401993-ACT

FGF5 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 5 (FGF-5), un ligando mitógeno secretado que señaliza a través de receptores FGFR con actividad tirosina cinasa para regular la proliferación celular, la diferenciación y la remodelación tisular. La actividad de FGF-5 activa cascadas canónicas de factores de crecimiento, incluidas MAPK/ERK y PI3K/AKT, influyendo en las interacciones epitelio‑mesénquima y en programas del desarrollo. En biología humana, la expresión alterada de FGF5 se ha vinculado con una señalización de crecimiento desregulada y se estudia con frecuencia en contextos como el ciclo de la piel y de los folículos pilosos, la remodelación asociada a heridas y la activación de vías oncogénicas. Estas características hacen de FGF5 un nodo útil para analizar la dinámica de señalización impulsada por FGFR y el control transcripcional de redes de factores de crecimiento.

FGF-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGF5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FGF-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGF5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGF5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FGF-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGF5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FGF-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FGF-5 en células tumorales con expresión de FGF5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.