Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-23: sc-401831-ACT

Le facteur de croissance des fibroblastes 23 (FGF23) code la protéine endocrine FGF-23, un régulateur clé de l’homéostasie systémique du phosphate et de la vitamine D. Sécrété principalement par les ostéocytes et les ostéoblastes, FGF-23 transmet son signal via les récepteurs FGFR de manière dépendante de Klotho afin d’inhiber la réabsorption rénale du phosphate et de réduire la synthèse de 1,25‑dihydroxyvitamine D, assurant ainsi le dialogue endocrinien entre l’os et le rein. Une expression dérégulée de FGF-23 est associée à des troubles héréditaires et acquis du métabolisme minéral, notamment le rachitisme/ostéomalacie hypophosphatémique, l’ostéomalacie induite par des tumeurs, et le trouble minéral et osseux lié à la maladie rénale chronique. En tant que nœud de voie reliant le transport du phosphate, le métabolisme de la vitamine D et la signalisation FGF/FGFR, FGF-23 est largement étudié en physiologie rénale, en biologie du squelette et dans les réponses au stress cardiométabolique.

FGF-23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGF23 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGF23 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGF23, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGF23 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-23 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGF23 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.