Partículas Lentivirales de Activación (m2) FGF-13: sc-420327-LAC-2

El gen Fgf13 del ratón codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 13 (FGF-13), un miembro intracelular de la familia FGF que funciona principalmente como regulador de la excitabilidad y de la organización del citoesqueleto, más que como un factor de crecimiento secretado. FGF-13 modula el tráfico y las propiedades de activación/inactivación (gating) de los canales de sodio dependientes de voltaje, influyendo en el inicio y la conducción del potencial de acción en neuronas y cardiomiocitos, y contribuye a la polarización dependiente de microtúbulos y a la migración neuronal durante el desarrollo. Por sus funciones en la regulación de canales iónicos y en la formación de circuitos neuronales, Fgf13 es relevante para estudios de fenotipos del neurodesarrollo y asociados a convulsiones, así como de anomalías en la conducción cardíaca. La edición génica de Fgf13 en modelos murinos permite el análisis mecanístico de canalopatías, señalización dependiente de la actividad y morfogénesis de axones y dendritas mediante electrofisiología, técnicas de imagen y perfiles transcriptómicos.

Las partículas de activación lentiviral FGF-13 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Fgf13 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FGF-13 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Fgf13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FGF-13. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Fgf13 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.