Plasmide CRISPR d'Activation (h) fetuin-A: sc-401125-ACT

AHSG code la fœtuine A, une glycoprotéine sécrétée par le foie qui circule à des concentrations élevées et module la signalisation extracellulaire en se liant à des ions minéraux et à divers ligands. La fœtuine A participe à la régulation de la biominéralisation et de la calcification en formant des complexes solubles avec le calcium et le phosphate, et elle peut influencer la signalisation des récepteurs ainsi que l’activité des protéases dans le milieu extracellulaire. Dans des contextes métaboliques et inflammatoires, la fœtuine A a été associée à la modulation de la signalisation du récepteur de l’insuline, à l’activation immunitaire liée aux lipides et à la communication endocrine hépatique. Une expression dérégulée d’AHSG ou des niveaux altérés de fœtuine A ont été associés à des traits cardiométaboliques, à des états inflammatoires chroniques et à des phénotypes de calcification ectopique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les voies de l’homéostasie systémique.

fetuin-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AHSG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

fetuin-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AHSG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AHSG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de fetuin-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AHSG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de fetuin-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie fetuin-A dans les cellules tumorales présentant une expression de AHSG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.