Plasmide Double Nickase (h) FEN-1: sc-403168-NIC

Le gène humain **FEN1** code la flap endonucléase 1 (FEN-1), une nucléase spécifique de structure qui clive les intermédiaires en « flap » 5′ générés lors de la maturation des fragments d’Okazaki et de la réparation par excision de base à long fragment (long-patch BER). FEN-1 agit de concert avec PCNA, les ADN polymérases et la ligase I pour préserver l’intégrité de la fourche de réplication et la stabilité du génome, et elle contribue au traitement des structures secondaires de l’ADN qui apparaissent en contexte de stress réplicatif. L’altération de la fonction de FEN1 est associée à une augmentation de la signalisation des dommages à l’ADN, de la mutagénèse et de l’instabilité chromosomique, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans les troubles héréditaires de maintenance du génome. Par conséquent, FEN-1 est largement utilisée comme nœud modèle pour étudier le choix des voies de réparation de l’ADN, la réparation associée à la réplication et les réponses aux agents génotoxiques.

FEN-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FEN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FEN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FEN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FEN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.