FEN-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403168

Übersicht

FEN1 kodiert die Flap-Endonuklease 1 (FEN-1), eine strukturspezifische Nuklease, die 5′-Flap-Intermediate während der Reifung von Okazaki-Fragmenten sowie bei der Long-Patch-Base-Excision-Repair (BER) spaltet. FEN-1 wirkt dabei mit PCNA und DNA-Polymerasen zusammen, um die Genauigkeit der DNA-Replikation zu unterstützen, die Verarbeitung gestoppter Replikationsgabeln zu ermöglichen und sekundäre DNA-Strukturen aufzulösen, die genomische Instabilität auslösen können. Über seine Funktionen in der Replikationsstressantwort, der Wahl von Reparaturwegen und der Aufrechterhaltung der chromosomalen Integrität ist eine veränderte FEN1-Funktion mit der Anhäufung von Mutationen und Signaturen verbunden, die mit Krebsbiologie und Empfindlichkeit gegenüber DNA-Schäden assoziiert sind. FEN-1 wird daher häufig als mechanistischer Einstiegspunkt genutzt, um DNA-Reparaturnetzwerke, replikationsgekoppelte Prozessierung und Checkpoint-Signalwege zu untersuchen.

Das FEN-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FEN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FEN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FEN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FEN-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FEN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FEN-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FEN1-Exone abzielen, die für die FEN-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FEN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FEN-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FEN-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FEN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FEN-1 HDR-Plasmid (h) und FEN-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FEN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FEN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.