Plasmide CRISPR/Cas9 KO FEM1B (m): sc-420316

Présentation

Fem1b code pour FEM1B, une protéine conservée contenant des répétitions ankyrine, impliquée dans la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et les réponses au stress cellulaire. FEM1B a été associée à la reconnaissance des substrats dans les voies des ligases E3 de l’ubiquitine et contribue à la régulation de l’apoptose ainsi qu’à des processus liés au cycle cellulaire, avec des effets en aval sur l’homéostasie mitochondriale et la signalisation métabolique. Dans les modèles murins, la fonction de Fem1b a été étudiée dans des contextes incluant l’équilibre énergétique, la régulation endocrinienne et le maintien des tissus, ce qui la rend pertinente pour des travaux mécanistiques sur le dysfonctionnement métabolique et les phénotypes d’adaptation au stress. Une activité altérée de FEM1B a également été associée à des modifications des réseaux de contrôle de la qualité des protéines, susceptibles d’influencer la susceptibilité dans des modèles de maladies dégénératives et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FEM1B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fem1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fem1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fem1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FEM1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fem1b pour l'étude de la signalisation de FEM1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fem1b essentiels à la fonction de FEM1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fem1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FEM1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FEM1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fem1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FEM1B plasmide HDR (m) et le FEM1B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fem1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fem1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.