Plásmido Doble Nickase (h) Fc ε RIγ: sc-417621-NIC

FCER1G codifica la subunidad de señalización FcεRIγ, un adaptador con motivo ITAM que se asocia con múltiples receptores inmunitarios para acoplar el reconocimiento del ligando a cascadas de activación intracelular. En contextos de células mieloides y mastocitos, FcεRIγ participa en la señalización de receptores Fc y de receptores de lectina tipo C, promoviendo la activación de las quinasas Src/Syk, el flujo de calcio aguas abajo, la señalización MAPK y programas transcripcionales que regulan la degranulación, la producción de citocinas y las respuestas fagocíticas. A través de estas vías, FcεRIγ contribuye a modular funciones efectoras innatas y dependientes de anticuerpos, y se estudia con frecuencia en la inflamación alérgica, la biología de las infecciones y la desregulación inmunitaria. La expresión alterada o la señalización a través de complejos de receptores asociados a FcεRIγ se ha vinculado con fenotipos inflamatorios y proporciona un punto de entrada mecanístico para analizar estados de activación de las células inmunitarias.

Fc ε RIγ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FCER1G en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FCER1G. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FCER1G. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FCER1G alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.