Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXO3 (m): sc-425412
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- FBXO3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique FBXO3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FBXO3 Antibody (C-7): sc-514625
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXO3 (m) | sc-425412 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Fbxo3 code chez la souris la protéine à boîte F FBXO3, un composant de reconnaissance des substrats des complexes ligases E3 SCF (SKP1–CUL1–RBX1), qui contribuent à contrôler la protéostasie via le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. En dirigeant une ubiquitination sélective, FBXO3 influence la dynamique de la signalisation cellulaire, les programmes de cycle cellulaire et de réponse au stress, ainsi que la stabilité des régulateurs de voies de signalisation. Une activité altérée au sein des réseaux SCF–F-box a été associée à une inflammation dérégulée et, plus largement, à des perturbations de la signalisation immunitaire, ainsi qu’à des changements de l’homéostasie cellulaire pertinents pour la biologie des maladies. Ces caractéristiques font de Fbxo3 un nœud utile pour étudier le contrôle, par la voie ubiquitine–protéasome, de la signalisation et du phénotype.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXO3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fbxo3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fbxo3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fbxo3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBXO3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fbxo3 pour l'étude de la signalisation de FBXO3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Fbxo3 essentiels à la fonction de FBXO3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fbxo3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le FBXO3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FBXO3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fbxo3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le FBXO3 plasmide HDR (m) et le FBXO3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fbxo3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fbxo3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.