FBXO29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433093

Übersicht

Fbxw8 kodiert das F‑Box‑Protein FBXO29, eine substraterkennende Komponente von SKP1–CUL1–F‑Box‑(SCF-)E3‑Ubiquitinligase-Komplexen, die bestimmte Proteine zur Ubiquitinierung und zum proteasomalen Abbau dirigiert. Durch den regulierten Abbau von Signal- und Zellzyklusregulatoren trägt FBXO29 zur Kontrolle der Proteinhomöostase, der Proliferation und von Differenzierungsprogrammen bei. Als Teil der ubiquitinabhängigen Qualitätskontrolle sind SCF‑artige Ligasen mit Signalwegen verknüpft, die Wachstumsfaktorsignale und Stressantworten prägen, wodurch Störungen von Fbxw8 für die Untersuchung von Mechanismen relevant sind, die einer fehlregulierten Proteostase zugrunde liegen, wie sie bei Krebs und anderen proliferativen oder entwicklungsbedingten Erkrankungen beobachtet wird. Mausmodelle für Fbxw8 sind daher nützlich, um Substratnetzwerke von Ubiquitinligasen und deren Einfluss auf zelluläre Phänotypen zu definieren.

Das FBXO29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fbxw8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fbxw8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fbxw8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FBXO29-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fbxw8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FBXO29-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fbxw8-Exone abzielen, die für die FBXO29-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fbxw8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FBXO29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FBXO29 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fbxw8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FBXO29 HDR-Plasmid (m) und FBXO29 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fbxw8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fbxw8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.