FBXO25 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405092-ACT

Das humane Gen **FBXO25** kodiert ein F‑Box‑Protein, das als Substraterkennungs-Komponente von **SCF‑(SKP1–CUL1–F‑box-)E3‑Ubiquitin-Ligase-Komplexen** fungiert und dadurch bestimmte Proteine gezielt der Ubiquitinierung und dem proteasomabhängigen Abbau zuführt. Durch die regulierte Proteindegradation trägt FBXO25 zur Kontrolle der Zellzyklusprogression, stressresponsiver Signalwege und zur Aufrechterhaltung der Proteostase bei. Störungen der SCF‑vermittelten Ubiquitin-Signalgebung können Transkriptionsprogramme und die zelluläre Homöostase umgestalten und verbinden veränderte F‑Box‑Aktivität mit krankheitsrelevanten Phänotypen in der Krebsbiologie und Neurobiologie. FBXO25 ist daher von Interesse, um die Verschaltung des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems und die nachgelagerten Effekte auf Signalgebung und Genexpression zu untersuchen.

FBXO25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FBXO25-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FBXO25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FBXO25-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FBXO25-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FBXO25-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FBXO25-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FBXO25-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FBXO25-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FBXO25-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.