Plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL8 (h): sc-406696

Présentation

FBXL8 (FBL8) code une protéine à domaine F-box, dont on prévoit qu’elle fonctionne comme composant de reconnaissance des substrats au sein des complexes E3 ubiquitine ligase SCF (SKP1–CUL1–F-box), soutenant ainsi le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Par l’ubiquitination sélective de protéines cibles, FBXL8 est susceptible d’influencer les programmes de protéostasie qui façonnent la progression du cycle cellulaire, la transduction du signal et les réponses au stress. Une perturbation de l’activité des ubiquitine ligases médiée par les F-box peut modifier le contrôle des points de contrôle et la dynamique des voies associées à la transformation oncogénique et à d’autres troubles prolifératifs. FBXL8 constitue donc un nœud d’étude utile pour examiner comment la dégradation ciblée s’articule avec l’homéostasie cellulaire et les réseaux de signalisation associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FBXL8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FBXL8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FBXL8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FBL8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FBXL8 pour l'étude de la signalisation de FBL8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FBXL8 essentiels à la fonction de FBL8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FBXL8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FBL8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FBL8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FBXL8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FBL8 plasmide HDR (h) et le FBL8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FBXL8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FBXL8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.