Plasmide Double Nickase (h) Fatty Acid Synthase: sc-400440-NIC

Le gène humain **FASN** code la **fatty acid synthase** (synthase des acides gras), un complexe enzymatique cytosolique multifonctionnel qui catalyse la synthèse *de novo* du palmitate à partir d'acétyl-CoA et de malonyl-CoA en utilisant le NADPH. L'activité de FASN contribue à l'homéostasie lipidique en fournissant des acides gras nécessaires à la biogenèse des membranes, à la palmitoylation des protéines et à la signalisation lipidique, reliant l'état nutritionnel aux programmes de croissance anaboliques. Elle s'interface avec des voies métaboliques centrales, notamment la navette citrate–malate–pyruvate, la production de NADPH et les réseaux transcriptionnels lipogéniques pilotés par SREBP, et elle répond aux signaux de l'insuline et de mTOR. Une lipogenèse dérégulée dépendante de FASN est largement étudiée dans les maladies métaboliques, l'inflammation associée à l'obésité, la stéatose hépatique et les états prolifératifs, où des flux lipidiques altérés peuvent remodeler les réponses cellulaires au stress et l'équilibre rédox.

Fatty Acid Synthase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FASN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FASN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FASN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FASN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.