Plasmide Double Nickase (m) Fatso: sc-424024-NIC

Le gène murin **Fto** code la protéine **Fatso**, une dioxygénase dépendante du **Fe(II)** et du **2‑oxoglutarate** qui agit comme déméthylase de l’ARN, avec une préférence pour la **N6‑méthyladénosine (m6A)** et d’autres adénosines méthylées apparentées. En modulant l’état de méthylation des ARN, Fatso influence l’épissage, la stabilité, la traduction et la dégradation des ARNm, façonnant ainsi des programmes d’expression génique qui contrôlent l’équilibre énergétique et les transitions d’état cellulaire. L’activité de Fto s’intègre aux réseaux de signalisation de détection des nutriments et de signalisation métabolique, notamment à des voies liées à l’adipogenèse et à la fonction mitochondriale. Une expression ou une fonction dérégulée de Fto a été associée à des traits liés à l’obésité et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée dans les études de régulation épitranscriptomique et des mécanismes de maladies entraînées par le métabolisme.

Fatso Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fto dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fto. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fto. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fto.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.