FAST CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406169

Übersicht

FASTK (Fas-aktivierte Serin/Threonin-Kinase) kodiert ein mitochondriales RNA-bindendes Protein, das an der posttranskriptionellen Regulation der mitochondrialen Genexpression beteiligt ist, einschließlich der Prozessierung und Stabilität spezifischer mtRNAs, die für die oxidative Phosphorylierung erforderlich sind. Über seine Funktionen bei der mitochondrialen Homöostase beeinflusst FASTK die zelluläre Bioenergetik, die Anpassung an Stress und die apoptotische Signalübertragung im Zusammenhang mit Fas-vermittelten Signalwegen. Eine Fehlregulation des mitochondrialen RNA-Stoffwechsels und der mit FASTK verbundenen OXPHOS-Kapazität wurde in Zusammenhängen wie metabolischem Stress, Neurodegeneration und Überlebensphänotypen von Krebszellen untersucht, in denen die mitochondriale Funktion ein entscheidender Faktor ist.

Das FAST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FASTK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FASTK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FASTK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAST-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FASTK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAST-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FASTK-Exone abzielen, die für die FAST-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FASTK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FASTK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAST HDR-Plasmid (h) und FAST HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FASTK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FASTK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.