Fascin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402535-ACT

FSCN1 codifica fascin 1, una proteina che aggrega i filamenti di actina e organizza fasci paralleli in filopodi, lamellipodi e altre strutture protrusive che supportano i cambiamenti della forma cellulare e la migrazione direzionata. Regolando il rimodellamento del citoscheletro e la dinamica delle adesioni, fascin 1 contribuisce a processi quali la motilità, comportamenti di tipo invasivo e la meccanotrasduzione, integrandosi con la segnalazione delle GTPasi Rho e con le vie di polimerizzazione dell’actina. Un’alterata espressione di FSCN1 è stata riportata in molteplici contesti oncologici e infiammatori ed è spesso associata a fenotipi migratori aumentati e a un maggiore potenziale metastatico. Queste caratteristiche rendono FSCN1 un bersaglio utile per studiare la regolazione del citoscheletro, le interazioni cellula–matrice e i programmi trascrizionali collegati alla transizione epitelio–mesenchimale.

Fascin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FSCN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Fascin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FSCN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FSCN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Fascin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FSCN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Fascin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Fascin 1 nelle cellule tumorali con espressione di FSCN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.