Plasmide Double Nickase (h) FANCD2: sc-400445-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FANCD2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FANCD2 Double Nickase (h) et le plasmide FANCD2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FANCD2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FANCD2 Antibody (FI17): sc-20022
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FANCD2 | sc-400445-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FANCD2 | sc-400445-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCD2 code un effecteur central de la voie de réparation des pontages interbrins de l’ADN (ICL) de l’anémie de Fanconi (AF) et coordonne le maintien du génome pendant la phase S. En cas de stress réplicatif et de dommages à l’ADN, FANCD2 est monoubiquitinée et recrutée sur la chromatine avec FANCI, ce qui favorise le traitement nucléolytique, la synthèse translésionnelle et la recombinaison homologue via un dialogue fonctionnel avec des facteurs de réparation associés à BRCA. La fonction de FANCD2 relie la stabilité des fourches de réplication, la signalisation des points de contrôle et la suppression des cassures chromosomiques, soutenant la viabilité cellulaire face à des stress génotoxiques endogènes et exogènes. Une altération ou une régulation déficiente de FANCD2 est associée à l’anémie de Fanconi et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte de phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et les troubles de la réparation de l’ADN.
FANCD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FANCD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FANCD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FANCD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FANCD2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.