FANCA Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420284-ACT

Il gene murino **Fanca** codifica **FANCA**, un componente centrale della via di riparo del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che tutela la stabilità del genoma durante la fase S. FANCA partecipa al complesso core della FA che promuove la monoubiquitinazione di FANCD2 e FANCI, coordinando il riconoscimento e la riparazione dei crosslink interfilamento del DNA attraverso un dialogo funzionale con la ricombinazione omologa e la protezione della forcella di replicazione. La perdita o la disfunzione di FANCA compromette la risoluzione degli intermedi di replicazione bloccati, aumentando le aberrazioni cromosomiche e l’ipersensibilità allo stress da agenti crosslinkanti. Poiché la via FA è strettamente legata al mantenimento ematopoietico e alla sorveglianza del genoma con funzione oncosoppressiva, **Fanca** è ampiamente studiato in modelli di instabilità genomica ereditaria e di risposte al danno al DNA rilevanti per il cancro.

FANCA Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fanca senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FANCA Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fanca nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fanca, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FANCA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fanca nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FANCA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FANCA nelle cellule tumorali con espressione di Fanca silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.