FANCA Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420284-ACT

O gene **Fanca** de camundongo codifica a FANCA, um componente central da via de reparo de DNA da anemia de Fanconi (FA), que protege a estabilidade do genoma durante a fase S. A FANCA participa do complexo central da FA, que promove a monoubiquitinação de FANCD2 e FANCI, coordenando o reconhecimento e o reparo de ligações cruzadas intercadeias no DNA por meio de interação com a recombinação homóloga e a proteção da forquilha de replicação. A perda ou disfunção de FANCA compromete a resolução de intermediários de replicação estagnados, aumentando as aberrações cromossômicas e a hipersensibilidade ao estresse causado por agentes que induzem ligações cruzadas. Como a via de FA está intimamente ligada à manutenção hematopoética e à vigilância genômica supressora de tumores, **Fanca** é amplamente estudado em modelos de instabilidade genômica hereditária e em respostas a danos no DNA relevantes para o câncer.

FANCA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fanca sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FANCA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fanca em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fanca, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FANCA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fanca nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FANCA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FANCA em células tumorais com expressão de Fanca silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.