Plásmido CRISPR de Activación (h) FAM20B: sc-411386-ACT

FAM20B codifica una xilosa quinasa de glicosaminoglucanos (GAG) residente en el aparato de Golgi, que fosforila el residuo de xilosa dentro de la región enlazadora tetrasacárida necesaria para la biosíntesis de proteoglicanos. Al regular el inicio y la elongación de las cadenas de heparán sulfato y de condroitín/dermatán sulfato, FAM20B influye en la organización de la matriz extracelular, la adhesión célula–matriz y la distribución de factores de crecimiento, incluidas vías de señalización como FGF, WNT y BMP. La alteración de la homeostasis de proteoglicanos/GAG se asocia con defectos en el desarrollo esquelético, la integridad del tejido conectivo y programas de señalización celular desregulados relevantes para la remodelación del microambiente tumoral. En consecuencia, FAM20B se estudia en vías que controlan la proliferación y la migración dependientes de la matriz, así como la morfogénesis del desarrollo.

FAM20B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM20B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAM20B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM20B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM20B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAM20B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM20B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAM20B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAM20B en células tumorales con expresión de FAM20B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.