FAM148C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414279-ACT

Das humane Gen C2CD4C kodiert FAM148C, ein mutmaßlich C2-Domänen-haltiges Protein, das an calciumabhängigen, membranassoziierten Prozessen und der intrazellulären Signalübertragung beteiligt ist. Obwohl seine molekularen Interaktionspartner bislang nicht vollständig charakterisiert sind, bringen Expressions- und genetische Assoziationsstudien C2CD4C mit der endokrinen und metabolischen Regulation in Verbindung, einschließlich der Biologie pankreatischer Inselzellen und insulinsekretionsbezogener Signalwege. Varianten in der Nähe von C2CD4C wurden mit einer erhöhten Anfälligkeit für Typ-2-Diabetes und verwandte kardiometabolische Merkmale assoziiert, was den Einsatz in Studien zur Genregulation, zur Stimulus-Sekretions-Kopplung und zu metabolischen Zellzustandsübergängen unterstützt. Die Modulation der FAM148C-Expression kann helfen zu klären, wie calciumresponsive Signal-Knotenpunkte Transkriptionsprogramme in krankheitsrelevanten Zelltypen beeinflussen.

FAM148C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C2CD4C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FAM148C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C2CD4C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C2CD4C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FAM148C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C2CD4C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FAM148C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FAM148C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C2CD4C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.