FAM123A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404231

Übersicht

AMER2 (FAM123A) ist ein zytoplasmatisches Protein, das an der Regulation der Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung sowie an mit der Zellpolarität verbundenen Prozessen beteiligt ist. Es verknüpft membrannahe Signale mit nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen, die Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Durch die Modulation von Komponenten des β‑Catenin-Regulationsnetzwerks kann FAM123A Zelladhäsion und die Organisation des Zytoskeletts beeinflussen, was potenziell Auswirkungen auf die Architektur epithelialer Gewebe hat. Eine veränderte Aktivität des Wnt-Signalwegs ist in der Entwicklungsbiologie wie auch bei der onkogenen Transformation breit relevant, wodurch AMER2 einen nützlichen Ansatzpunkt bietet, um Abhängigkeiten vom Signalzustand zu untersuchen. Forschung zu AMER2/FAM123A unterstützt mechanistische Studien zu Signalweg-Crosstalk, kontextspezifischen Transkriptionsausgaben und Genotyp‑Phänotyp‑Beziehungen in humanen Zellmodellen.

Das FAM123A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AMER2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AMER2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AMER2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAM123A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AMER2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAM123A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AMER2-Exone abzielen, die für die FAM123A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AMER2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAM123A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAM123A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AMER2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAM123A HDR-Plasmid (h) und FAM123A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AMER2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AMER2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.