FAK Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400089-LAC

PTK2 codifica la focal adhesion kinase (FAK), una tirosin-chinasi non recettoriale che integra segnali provenienti da integrine e recettori per fattori di crescita per regolare il turnover delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la meccanotrasduzione. FAK coordina vie di segnalazione a valle, tra cui PI3K–AKT, MAPK/ERK e le GTPasi della famiglia Rho, per controllare migrazione, sopravvivenza e proliferazione cellulare. Un’attività di FAK deregolata e un’alterazione della segnalazione delle adesioni focali sono frequentemente associate a fenotipi invasivi, rimodellamento della matrice extracellulare e programmi trascrizionali legati alla metastasi in molteplici tipi di tumore. Inoltre, la segnalazione PTK2/FAK contribuisce all’angiogenesi, al sensing della matrice associato alla fibrosi e al traffico delle cellule infiammatorie, rendendola un nodo chiave per lo studio delle reti di segnalazione dipendenti dall’adesione.

Le particelle di attivazione lentivirale FAK (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PTK2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAK (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PTK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PTK2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.