Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAIM2: sc-404103-ACT

FAIM2 (Fas apoptotic inhibitory molecule 2), également appelé Lifeguard, est une protéine anti-apoptotique associée à la membrane qui module la signalisation des récepteurs de mort et la survie neuronale. Elle atténue l’apoptose médiée par Fas/CD95, influençant les cascades apoptotiques extrinsèques, l’activation des caspases et les voies de réponse au stress qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire. L’expression de FAIM2 est enrichie dans les tissus neuronaux et a été liée à des mécanismes de neuroprotection, de maintien synaptique et de résilience cellulaire en conditions de stress inflammatoire ou métabolique. Une activité dérégulée de FAIM2 a été associée à une sensibilité modifiée à l’apoptose dans des contextes pertinents pour la neurodégénérescence, des phénotypes métaboliques et la biologie de la survie des cellules tumorales.

FAIM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAIM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAIM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAIM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAIM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAIM2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAIM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAIM2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAIM2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FAIM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.