FADS6 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-435879-ACT

Mouse Fads6 kodiert FADS6, eine mutmaßliche Fettsäure-Desaturase, die mit der Homöostase des Lipidstoffwechsels und dem Remodeling zellulärer Membranphospholipide in Zusammenhang steht. Als Teil umfassenderer Netzwerke der Fettsäure-Desaturierung und -Elongierung kann FADS6 das Gleichgewicht zwischen gesättigten und ungesättigten Fettsäuren beeinflussen, das Membranfluidität, Organellenfunktion und lipidvermittelte Signalübertragung prägt. Eine veränderte Desaturase-Aktivität wird häufig mit Verschiebungen des Entzündungsniveaus, der Empfindlichkeit gegenüber oxidativem Stress und der metabolischen Anpassung in Geweben mit hohem Lipidumsatz in Verbindung gebracht. Entsprechend ist Fads6 für die Untersuchung der Regulation des Lipidhandlings auf Signalweg-Ebene in metabolischen und neuroimmunologischen Kontexten von Interesse, die für die Biologie komplexer Erkrankungen relevant sind.

FADS6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fads6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FADS6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fads6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fads6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FADS6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fads6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FADS6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FADS6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fads6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.