Plasmide Double Nickase (h) Factor B: sc-402091-NIC

Le facteur du complément B (CFB) code le facteur B, un zymogène central de protéase à sérine de la voie alternative du complément, qui amplifie les réponses immunitaires innées à la surface des microbes et des surfaces du soi altérées. Après la liaison à C3b, le facteur B est clivé par le facteur D pour générer le fragment Bb, formant la C3 convertase (C3bBb) qui favorise l’opsonisation, la production d’anaphylatoxines et, en aval, la formation du complexe d’attaque membranaire. Cet axe recoupe la signalisation inflammatoire, la gestion des complexes immuns et les interactions avec les réseaux de coagulation et de cytokines dans les microenvironnements tissulaires. Une activité dérégulée de la voie alternative et des variations génétiques de CFB sont impliquées dans des phénotypes inflammatoires médiés par le complément, notamment en pathobiologie oculaire et rénale, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier l’amplification du complément dans des systèmes cellulaires humains.

Factor B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CFB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CFB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CFB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CFB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.