Plasmide CRISPR/Cas9 KO F-Spondin (m): sc-433292

Présentation

Spon1 code la F-spondine, une glycoprotéine associée à la matrice extracellulaire qui joue un rôle de signal de guidage axonal et d’adhérence neuronale au cours du développement et du remodelage du système nerveux central. La F-spondine interagit avec des récepteurs de surface cellulaire et des protéoglycanes afin de moduler la croissance des neurites, la migration cellulaire et l’organisation synaptique, et elle est couramment associée à la signalisation de la matrice extracellulaire ainsi qu’aux processus de remodelage matriciel dépendants des protéases. Dans les tissus murins, l’expression de SPON1 a été utilisée pour explorer les voies impliquées dans la structuration neurodéveloppementale et la plasticité liée aux lésions, ainsi que les modifications du microenvironnement vasculaire et inflammatoire. Des altérations de la biologie de SPON1/F-spondine ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neurologiques et pertinents pour la neurodégénérescence, où une signalisation dépendante de la matrice extracellulaire peut façonner la connectivité neuronale et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO F-Spondin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Spon1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Spon1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Spon1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine F-Spondin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Spon1 pour l'étude de la signalisation de F-Spondin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Spon1 essentiels à la fonction de F-Spondin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Spon1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le F-Spondin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le F-Spondin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Spon1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le F-Spondin plasmide HDR (m) et le F-Spondin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Spon1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Spon1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.