Plasmide CRISPR d'Activation (m) EYA1: sc-420254-ACT

Eya1 code le coactivateur transcriptionnel et la phosphatase à tyrosine EYA1, un régulateur clé de l’organogenèse et des décisions de destin cellulaire au cours du développement chez la souris. EYA1 agit dans des programmes transcriptionnels nucléaires avec les facteurs SIX et DACH, et participe également à une signalisation dépendante de la phosphorylation qui influence la prolifération, la survie et la différenciation. Son activité est étroitement liée à des voies de développement contrôlant la formation des organes sensoriels, la néphrogenèse et la mise en place des structures cranio-faciales, ce qui fait d’Eya1 un gène modèle largement utilisé pour étudier les réseaux de régulation génique. Des altérations du dosage ou de la régulation d’Eya1 sont associées à des phénotypes de développement congénitaux et offrent un point d’entrée mécanistique pour disséquer le contrôle de la morphogenèse dépendant à la fois de la transcription et de l’activité phosphatase.

EYA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Eya1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EYA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Eya1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Eya1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EYA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Eya1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EYA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EYA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Eya1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.