Plásmido Doble Nickase (m) EXT1: sc-420252-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EXT1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EXT1 (m) y el plásmido de doble nickasa EXT1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ext1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EXT1 Anticuerpo (A-7): sc-515144
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EXT1 | sc-420252-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **EXT1** codifica la glicosiltransferasa exostosina 1 (EXT1), un componente esencial del complejo EXT1/EXT2 que cataliza la elongación de las cadenas de heparán sulfato en el aparato de Golgi. Al controlar la biosíntesis de proteoglucanos de heparán sulfato, EXT1 modula las interacciones ligando–receptor y la formación de gradientes que influyen en vías como la señalización de FGF, Wnt, Hedgehog y BMP. La estructura de los glicosaminoglucanos dependiente de EXT1 también afecta la organización de la matriz extracelular, la adhesión celular y el tráfico endocítico de morfógenos y factores de crecimiento. La alteración de la función de EXT1 se asocia con un desarrollo esquelético aberrante y con cambios en el patrón tisular, por lo que constituye una diana clave para estudiar la señalización regulada por heparán sulfato y la biología de la matriz.
EXT1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ext1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ext1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ext1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ext1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.