Plasmide CRISPR d'Activation (h) EXOSC8: sc-405322-ACT

EXOSC8 code une sous-unité centrale du complexe exosome d’ARN humain, une exoribonucléase multiprotéique 3′–5′ qui assure le contrôle qualité et le renouvellement des ARN dans le noyau et le cytoplasme. En orchestrant le traitement et la dégradation des ARNr, snARN, snoARN et des intermédiaires de dégradation des ARNm, EXOSC8 contribue à des voies de surveillance de l’ARN qui maintiennent l’intégrité du transcriptome et la protéostase. La perturbation de la fonction de l’exosome altère la biogenèse des ribosomes, l’homéostasie transcriptionnelle et les réponses au stress, reliant la dérégulation d’EXOSC8 à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs rapportés pour des gènes associés à l’exosome. Ainsi, EXOSC8 constitue une cible utile pour l’étude du métabolisme de l’ARN, du traitement co‑transcriptionnel et des mécanismes de dégradation de l’ARN dans les cellules humaines.

EXOSC8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EXOSC8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EXOSC8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EXOSC8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EXOSC8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EXOSC8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EXOSC8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EXOSC8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EXOSC8 dans les cellules tumorales présentant une expression de EXOSC8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.