Plasmide CRISPR/Cas9 KO EXOSC4 (h): sc-405751

Présentation

EXOSC4 code un composant central du complexe exosome d’ARN, une exoribonucléase multisous-unité 3′–5′ qui assure la surveillance et le renouvellement des ARN dans le noyau et le cytoplasme. En soutenant le traitement et la dégradation de diverses espèces d’ARN, notamment l’ARNr, les sn/snoARN et des transcrits aberrants ou instables, EXOSC4 contribue au contrôle qualité des ARN, à la biogenèse des ribosomes et au maintien de l’homéostasie du transcriptome. La fonction de l’exosome s’articule avec le traitement co-transcriptionnel des ARN, l’export nucléaire et les voies de dégradation des ARN qui façonnent les programmes d’expression génique. La dérégulation de facteurs associés à l’exosome a été liée à une altération du métabolisme des ARN et à des réponses au stress cellulaire, faisant d’EXOSC4 un nœud pertinent pour des études mécanistiques des défauts de traitement des ARN dans des contextes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EXOSC4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EXOSC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EXOSC4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EXOSC4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EXOSC4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EXOSC4 pour l'étude de la signalisation de EXOSC4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EXOSC4 essentiels à la fonction de EXOSC4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EXOSC4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EXOSC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EXOSC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EXOSC4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EXOSC4 plasmide HDR (h) et le EXOSC4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EXOSC4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EXOSC4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.