Exo70 Double Nickase Plasmid (m): sc-424708-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Exo70 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Exo70 Double-Nickase-Plasmid (m) und Exo70 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Exoc7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Exo70: sc-365825
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Exo70 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Exo70 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Exoc7 kodiert Exo70, eine zentrale Untereinheit des oktameren Exocyst-Komplexes, der sekretorische Vesikel an spezifische Stellen der Plasmamembran anheftet und so polarisierte Exozytose ermöglicht. In Mauszellen unterstützt Exo70 Membrantransportprozesse, die für epitheliale Polarität, Neuritenauswuchs, Zytokinese und gerichtete Zellmigration erforderlich sind, indem es das Andocken von Vesikeln mit dem Umbau des Aktinzytoskeletts und Signalwegen kleiner GTPasen koordiniert. Exocyst-abhängiger Transport beeinflusst das Recycling von Rezeptoren sowie die Oberflächenbereitstellung von Adhäsionsmolekülen und verknüpft die Funktion von Exo70 mit Signalwegen, die Zellform, Invasion und Gewebemorphogenese regulieren. Eine Fehlregulation von Exocyst-Komponenten wurde mit abweichender Zellmotilität und Entwicklungsdefekten in Verbindung gebracht, wodurch Exoc7 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu transportgetriebenen Phänotypen ist.
Exo70 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Exoc7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Exoc7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Exoc7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Exoc7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.