Plásmido Doble Nickase (h) ETO-2: sc-404475-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ETO-2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ETO-2 (h) y el plásmido de doble nickasa ETO-2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CBFA2T3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ETO-2 Anticuerpo (C-12): sc-373691
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ETO-2 | sc-404475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ETO-2 | sc-404475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBFA2T3 codifica ETO-2, un correpresor transcripcional nuclear que se asocia con factores de unión al ADN específicos de secuencia para regular la expresión génica hematopoyética y el compromiso de linaje. ETO-2 actúa dentro de complejos represores multiproteicos que comúnmente incluyen N-CoR/SMRT, HDACs y otros modificadores de la cromatina, vinculando la transcripción dependiente de señales con el control epigenético. A través de interacciones con proteínas de la familia RUNX y otros reguladores transcripcionales relacionados, ETO-2 ayuda a coordinar programas que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis en contextos de células sanguíneas e inmunitarias. La actividad alterada de CBFA2T3/ETO-2 y las redes de correpresores desreguladas se asocian con estados transcripcionales relevantes para neoplasias hematológicas, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudiar circuitos transcripcionales oncogénicos.
ETO-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CBFA2T3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CBFA2T3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CBFA2T3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CBFA2T3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.