ETAR Double Nickase Plasmid (h): sc-401000-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ETAR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ETAR Double-Nickase-Plasmid (h) und ETAR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EDNRA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ETAR: sc-518060
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ETAR Double Nickase Plasmid (h) | sc-401000-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETAR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401000-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Endothelinrezeptor Typ A (ETAR), kodiert durch das humane Gen **EDNRA**, ist ein G‑Protein‑gekoppelter Rezeptor, der Endothelin‑1 bindet, um die Kontraktion der glatten Gefäßmuskulatur, die Zellproliferation und calciumabhängige Signalwege zu regulieren. ETAR koppelt vorwiegend an **Gq/11**, aktiviert dadurch die **Phospholipase C**, erzeugt **IP3/DAG** und schaltet nachgeschaltete **MAPK‑** sowie **Rho/ROCK‑**Signalwege ein, wodurch Signale integriert werden, die den Vasomotorentonus und das Gewebe‑Remodeling prägen. Eine durch EDNRA vermittelte Signalgebung beeinflusst das Zusammenspiel zwischen Endothel und glatter Muskulatur und trägt in unterschiedlichen zellulären Kontexten zu angiogenen und entzündlichen Programmen bei. Eine fehlregulierte ETAR‑Aktivität wurde mit kardiopulmonalen Gefäßfunktionsstörungen, fibrotischem Remodeling und Prozessen im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, wodurch **EDNRA** ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Rezeptor‑Signalnetzwerken darstellt.
ETAR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EDNRA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EDNRA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EDNRA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EDNRA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.