ERp72 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419416

Descripción general

El gen Pdia4 del ratón codifica ERp72, un miembro de la familia de las isomerasas de disulfuro de proteínas que reside en el retículo endoplásmico y cataliza el intercambio tiol–disulfuro durante el plegamiento oxidativo de proteínas. ERp72 contribuye al control de calidad del RE al promover la formación correcta de enlaces disulfuro y al cooperar con redes de chaperonas que regulan el plegamiento, el ensamblaje y la retención de proteínas secretoras y de membrana. A través de sus funciones en la proteostasis, Pdia4 está vinculado funcionalmente a la señalización de estrés del RE y a las vías de respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), que moldean el equilibrio redox y las decisiones sobre el destino celular en condiciones de alta carga secretora. La alteración de la actividad de las PDI y la adaptación al estrés del RE se estudian con frecuencia en contextos como la inflamación, la disfunción metabólica y la biología del cáncer, donde la homeostasis de la vía secretora y la capacidad de plegamiento oxidativo pueden influir en fenotipos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERp72 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pdia4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pdia4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pdia4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERp72.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pdia4 para la investigación de la señalización de ERp72, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pdia4 críticos para la función de ERp72
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pdia4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ERp72 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ERp72 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pdia4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERp72 (m) y el plásmido HDR ERp72 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pdia4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pdia4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.