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ERp57双切口酶质粒(m) | sc-420698-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERp57双切口酶质粒(m2) | sc-420698-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Pdia3 编码 ERp57(PDIA3),这是一种内质网蛋白二硫键异构酶,可与钙联蛋白(calnexin)和钙网蛋白(calreticulin)协同作用,催化新生糖蛋白的氧化折叠并进行质量控制。ERp57 的活性有助于维持内质网蛋白稳态、促进二硫键形成,并参与与内质网应激及未折叠蛋白反应(UPR)相关的信号传导,从而影响通过 MHC I 类肽装载实现的抗原呈递。PDIA3/ERp57 功能失调与氧化还原平衡改变、蛋白毒性应激反应,以及与神经退行性变、代谢功能障碍和肿瘤生物学相关的通路有关。作为一种多功能氧化还原酶,ERp57 也因其在钙稳态、细胞黏附相关信号以及应激适应性转录程序中的作用而受到研究关注。
ERp57 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Pdia3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Pdia3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Pdia3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Pdia3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。