ERp57 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-420698-KO-2

Panoramica

Pdia3 codifica ERp57, un’isomerasi delle disolfuro proteine del reticolo endoplasmatico che collabora con calnexina e calreticulina per catalizzare la formazione e l’isomerizzazione dei ponti disolfuro durante il ripiegamento delle glicoproteine. ERp57 sostiene il controllo qualità del RE e la proteostasi promuovendo la maturazione di proteine secretorie e di membrana e influenzando la segnalazione della risposta alle proteine non ripiegate (UPR) in condizioni di stress del RE. Nel sistema immunitario, ERp57 contribuisce al caricamento dei peptidi sul complesso maggiore di istocompatibilità di classe I come parte del complesso di caricamento dei peptidi, collegando il ripiegamento dipendente dal redox alla presentazione dell’antigene. Un’alterata attività di ERp57 è stata associata a una disregolazione dell’omeostasi proteica e delle vie dello stress ossidativo, rilevanti per la ricerca su neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pdia3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pdia3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pdia3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERp57.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pdia3 per lo studio della segnalazione di ERp57, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pdia3 critici per la funzione di ERp57
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pdia3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pdia3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERp57 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ERp57 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pdia3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pdia3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.