ERK 5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400891-ACT

MAPK7 codifica a ERK5, uma quinase MAP atípica que integra sinais de fatores de crescimento, citocinas e estresse celular para regular programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e sobrevivência. A ERK5 é ativada a jusante de MEK5 e modula alvos que incluem fatores de transcrição da família MEF2, conectando a sinalização por MAPK à função endotelial, à remodelação do citoesqueleto e a respostas ao estresse mecânico ou oxidativo. Por meio de sua atividade quinase e de seu domínio exclusivo de ativação transcricional na região C-terminal, a ERK5 influencia a progressão do ciclo celular e a expressão gênica associada à migração. A desregulação da sinalização MAPK7/ERK5 tem sido associada a alterações na sinalização angiogênica e na organização de vias oncogênicas em múltiplos contextos tumorais, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de crosstalk em redes de MAPK.

ERK 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPK7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ERK 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPK7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPK7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ERK 5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPK7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ERK 5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ERK 5 em células tumorais com expressão de MAPK7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.