eRF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405156-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eRF1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eRF1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase eRF1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ETF1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eRF1 Anticorpo (B-11): sc-365686
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eRF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eRF1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene humano **ETF1** codifica o fator de liberação eucariótico 1 (**eRF1**), um fator essencial de terminação da tradução que reconhece os três códons de parada e promove a hidrólise do peptidil-tRNA no sítio A do ribossomo em conjunto com **eRF3/GSPT1**. Por seu papel central na proteostase, o eRF1 ajuda a manter a fidelidade da tradução do mRNA e limita o *readthrough* de códons de parada, vinculando a atividade de **ETF1** a vias de controle de qualidade e vigilância ribossomal, como a degradação de mRNA mediada por nonsense (*nonsense-mediated mRNA decay*). A perturbação da terminação da tradução pode remodelar a sinalização de resposta ao estresse, a carga de dobramento proteico e programas globais de expressão gênica relevantes para a homeostase celular. Assim, **ETF1** é de interesse em estudos de controle translacional, reconhecimento de códons e mecanismos que acoplam a dinâmica ribossomal ao desequilíbrio do proteoma associado a doenças.
eRF1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ETF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ETF1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ETF1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ETF1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.