ERdj4 Double Nickase Plasmid (h): sc-410882-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERdj4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERdj4 Double-Nickase-Plasmid (h) und ERdj4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNAJB9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERdj4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERdj4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die humane DNAJB9-Gen kodiert ERdj4, einen luminalen Hsp40/DnaJ-Ko-Chaperon des endoplasmatischen Retikulums (ER), der mit BiP/HSPA5 zusammenwirkt, um die Proteinfaltung zu fördern und die ER-Qualitätskontrolle sicherzustellen. ERdj4 ist an der Unfolded-Protein-Response (UPR) und am ER-assoziierten Abbau (ERAD) beteiligt und unterstützt die Proteostase, indem es fehlgefaltete Client-Proteine erkennt und deren Verarbeitung während ER-Stress erleichtert. Über diese Signalwege hilft DNAJB9, die Reifung sekretorischer Proteine und die zelluläre Anpassung an proteotoxischen Stress zu regulieren – Prozesse, die mit Erkrankungen in Verbindung stehen, die durch abnorme Proteinaggregation und chronische UPR-Signalisierung gekennzeichnet sind. Eine veränderte Expression von DNAJB9/ERdj4 wurde in Kontexten zellulären Stresses beschrieben und als molekularer Readout in Studien genutzt, die ER-Proteostase mit entzündlichen und metabolischen Funktionsstörungen verknüpfen.
ERdj4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNAJB9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNAJB9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNAJB9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNAJB9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.