Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERdj3 (h): sc-404935

Présentation

DNAJB11 code pour ERdj3, un co-chaperon Hsp40 luminal du réticulum endoplasmique (RE) qui s’associe à BiP/HSPA5 afin de favoriser le repliement des protéines sécrétoires et membranaires nouvellement synthétisées et de limiter leur agrégation. ERdj3 contribue à la protéostasie du RE en stimulant l’activité ATPase de BiP, en coordonnant les décisions de contrôle qualité liées à la dégradation associée au RE (ERAD) et en modulant la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) lors du stress du RE. Par ces fonctions, DNAJB11 influence l’efficacité de la voie sécrétoire et l’adaptation cellulaire à une charge de protéines mal repliées, des processus impliqués dans des troubles caractérisés par un déséquilibre de la protéostasie, notamment des atteintes rénales et hépatiques ainsi que des réponses au stress associées au cancer. Son rôle au sein des réseaux de chaperons en fait une cible pertinente pour étudier la manière dont le stress du RE s’articule avec l’apoptose, l’inflammation et le remodelage métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERdj3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAJB11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAJB11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAJB11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERdj3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAJB11 pour l'étude de la signalisation de ERdj3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNAJB11 essentiels à la fonction de ERdj3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAJB11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERdj3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ERdj3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAJB11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERdj3 plasmide HDR (h) et le ERdj3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAJB11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAJB11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.