Plasmide CRISPR/Cas9 KO EPX (h): sc-402513

Présentation

EPX (éosinophile peroxydase) code une enzyme granulaire contenant un groupement hème, exprimée principalement dans les éosinophiles, où elle catalyse des réactions oxydatives dépendantes des halogénures et du thiocyanate, contribuant à l’activité antimicrobienne et à la modulation des microenvironnements inflammatoires. En générant des oxydants réactifs, EPX s’inscrit à l’interface des voies effectrices de l’immunité innée, de la signalisation redox et des mécanismes de remodelage de la matrice extracellulaire qui influencent le recrutement leucocytaire et les réponses de lésion tissulaire. Une activité EPX altérée et la dégranulation des éosinophiles ont été associées à l’inflammation éosinophilique dans les maladies des voies aériennes et du tractus gastro-intestinal, ainsi qu’aux réactions d’hypersensibilité. EPX est donc largement utilisée comme indicateur moléculaire de l’activation des éosinophiles et comme nœud fonctionnel pour étudier les dommages induits par le stress oxydatif et la régulation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EPX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EPX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EPX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EPX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EPX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EPX pour l'étude de la signalisation de EPX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EPX essentiels à la fonction de EPX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EPX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EPX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EPX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EPX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EPX plasmide HDR (h) et le EPX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EPX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EPX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.