Plásmido CRISPR de Activación (h) EphB3: sc-403039-ACT

EPHB3 codifica la tirosina quinasa receptora EphB3, un miembro del sistema de señalización Eph/ephrina que media la comunicación dependiente de contacto entre células vecinas. EphB3 participa en señalización bidireccional que coordina la adhesión celular, la remodelación del citoesqueleto, la migración y la formación de límites durante el desarrollo y la organización tisular. Mediante interacciones con ligandos efrina‑B, EphB3 influye en vías que regulan la guía axonal y la arquitectura epitelial, con efectos posteriores sobre las GTPasas de la familia Rho y redes de fosforilación relacionadas. La desregulación de la señalización de EphB3 se ha vinculado con cambios en el posicionamiento celular y un comportamiento invasivo en el cáncer, así como con alteraciones en el patrón de circuitos neuronales en contextos del neurodesarrollo.

EphB3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EPHB3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EphB3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EPHB3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EPHB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EphB3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EPHB3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EphB3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EphB3 en células tumorales con expresión de EPHB3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.