Particules Lentivirales d'Activation (h2) EphA7: sc-401722-LAC-2

Chez l’humain, EPHA7 code le récepteur tyrosine kinase EphA7, un récepteur membranaire des éphrines qui assure une signalisation dépendante du contact afin de réguler le positionnement cellulaire, le guidage axonal et la formation des frontières tissulaires au cours du développement. L’activation d’EphA7 par des ligands éphrine-A déclenche une signalisation bidirectionnelle et des voies en aval incluant le contrôle des dynamiques du cytosquelette par les GTPases de la famille Rho ainsi que la modulation des réseaux MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant l’adhésion, la migration et la prolifération. Une expression ou une signalisation dérégulée d’EPHA7 a été associée à des altérations des circuits neurodéveloppementaux et à des processus oncogéniques tels qu’une perturbation du contrôle de la croissance et un comportement invasif dans de multiples contextes tumoraux. Les outils d’édition du gène EPHA7 et de génomique fonctionnelle soutiennent des études mécanistiques de la signalisation éphrine–Eph, de la phosphorylation et du trafic des récepteurs, ainsi que des interactions entre voies de signalisation dans des modèles neuronaux, des organoïdes et des systèmes de cellules cancéreuses.

Les particules d'activation lentivirales EphA7 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EPHA7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EphA7 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EPHA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EphA7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EPHA7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.