非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
Epac 抗体 (A-5): sc-28366. 对 HeLa 全细胞裂解液中 Epac 的表达进行 Western 印迹分析.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
Epac CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-401807
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Epac CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在Epac基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Epac: sc-28366，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Epac CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-401807 | 20 µg | $397.00 |
概述
RAPGEF3 编码 Epac（由 cAMP 直接激活的交换蛋白），它是一种鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF），将 cAMP 信号与 Rap1 和 Rap2 小 GTP 酶的激活连接起来。Epac 通过与 PKA、MAPK 以及整合素信号网络交叉的 cAMP 依赖性通路，调控细胞黏附、内皮屏障调节、分泌以及钙依赖性反应等过程中的细胞内信号转导。在人类细胞中，RAPGEF3/Epac 的活性会影响血管与免疫细胞功能，并已在代谢调控、炎症信号以及肿瘤相关细胞迁移表型等研究背景中得到探讨。解析 RAPGEF3 依赖的 cAMP–Rap 信号有助于阐明第二信使的动态变化如何塑造细胞骨架重塑与区室化的信号复合体。
Epac CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中RAPGEF3基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对RAPGEF3基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏RAPGEF3开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使Epac蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建RAPGEF3缺失的细胞模型，用于Epac信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 Epac 功能至关重要的 RAPGEF3 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 RAPGEF3 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 Epac CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 Epac CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 RAPGEF3 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 Epac HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 Epac HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由RAPGEF3同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定RAPGEF3靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。