Plásmido CRISPR de Activación (h) Endophilin III: sc-403821-ACT

SH3GL3 codifica la endofilina III, una proteína de remodelación de membranas que contiene un dominio BAR y que participa en la endocitosis mediada por clatrina y en el reciclaje de vesículas sinápticas al detectar y generar curvatura de membrana. La endofilina III coordina con la dinamina y otros adaptadores endocíticos para promover la gemación y el tráfico de vesículas, conectando la dinámica de membranas con la organización del citoesqueleto y la internalización de receptores. La expresión de SH3GL3 está enriquecida en tejidos neuronales y se estudia con frecuencia en vías que regulan la neurotransmisión, el recambio de vesículas y la señalización intracelular. Las alteraciones en la regulación endocítica y en el ciclo de vesículas sinápticas se implican a menudo en mecanismos de enfermedad relacionados con la neurobiología, lo que convierte a SH3GL3 en una diana útil para estudios mecanísticos de la función neuronal y de defectos en el tráfico de membranas.

Endophilin III El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SH3GL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Endophilin III El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SH3GL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SH3GL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Endophilin III. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SH3GL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Endophilin III en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Endophilin III en células tumorales con expresión de SH3GL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.