ENC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420175

Descripción general

ENC1 (ectodermal-neural cortex 1) codifica una proteína que contiene repeticiones kelch y que actúa como adaptador asociado a la actina, implicado en la organización del citoesqueleto y en programas de diferenciación celular. En tejidos de ratón, la expresión de ENC1 se encuentra enriquecida en linajes neuronales y otros linajes en diferenciación, donde se ha relacionado con la modulación de las respuestas al estrés oxidativo y de la homeostasis proteica. Interacciones y asociaciones de vías descritas sitúan a ENC1 en procesos que regulan cambios en la forma celular, el crecimiento de neuritas y el recambio regulado de proteínas asociadas al citoesqueleto, incluido el crosstalk con mecanismos dependientes de ubiquitina. Se ha observado una expresión desregulada de ENC1 en contextos de alteraciones del neurodesarrollo y biología tumoral, lo que respalda su uso como herramienta molecular para estudiar el estado de diferenciación y la señalización adaptativa al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ENC1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Enc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Enc1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Enc1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ENC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Enc1 para la investigación de la señalización de ENC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Enc1 críticos para la función de ENC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Enc1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ENC1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ENC1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Enc1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ENC1 (m) y el plásmido HDR ENC1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Enc1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Enc1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.