Particules Lentivirales d'Activation (m) EN1/Engrailed 1: sc-420171-LAC

En1 code le facteur de transcription à homéoboîte EN1/Engrailed 1, un régulateur de la liaison à l’ADN spécifique de séquence essentiel à la mise en place du patron midbrain–hindbrain (mésencéphale–rhombencéphale), au développement du cervelet et à l’établissement de l’identité des sous-types neuronaux chez la souris. EN1 module les réseaux de régulation génique du développement en coordonnant des programmes transcriptionnels qui influencent la spécification du destin cellulaire, la morphogenèse et le guidage axonal. Dans les tissus différenciés, EN1 contribue au maintien des circuits neuronaux et aux réponses au stress cellulaire grâce à un contrôle transcriptionnel étendu de la survie neuronale et de la fonction synaptique. Une expression ou une activité d’EN1 dérégulée sert de levier de recherche pour étudier les défauts du neurodéveloppement, la formation des circuits et des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence et la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique.

Les particules d'activation lentivirales EN1/Engrailed 1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de En1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EN1/Engrailed 1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription En1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EN1/Engrailed 1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif En1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.